抗体纯化磁珠（Beads Protein A（or A/G )Antibody Purification Kit）

规格：1mL/5mL

保存：2-8℃，保质期1 年

产品内容：

Beads Protein A（or A/G）抗体纯化磁珠系列产品是利用蛋白偶联技术使Protein A（or A/G）共价包被到 NHS 活化的超顺磁性微球表面。该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。

本产品为纳米级磁性微球，具有超大比表面积，可大幅度缩短抗体吸附所需的时间，熟练操作可在 15 min 内完成抗体吸附过程，30 min 内完成抗体纯化流程。抗体纯化磁珠试剂盒配有经过优化的预制缓冲液，为抗体纯化实验提供了最佳的反应条件，增强了抗体纯化实验的稳定性。

产品特性：

适用范围：

适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。

注意：

磁珠结合 Human IgG 能力（Antibody Capacity）分别为：Protein A：1.4~1.6 mg/mL; Protein A/G： 1.8~2.0 mg/mL。

操作步骤（仅供参考）

不同种类的免疫磁珠具有不同的抗体结合能力，在执行抗体纯化操作之前，操作者应首先估算待纯化样品中的抗体含量（一般血清样品中抗体含量约 2~8 mg/mL，细胞培养物中抗体浓度因表达量不同而变化较大）；然后根据所选免疫磁珠的抗体结合能力（见免疫磁珠相关产品列表或者产品组成的 Antibody Capacity 数据），计算免疫磁珠的大概用量，免疫磁珠用量过多或过少均影响抗体纯化的效果，建议免疫磁珠用量的最大载量应为样品抗体含量的 80%~100%。

以下操作步骤按照纯化抗体，取用 100 µL Protein A 抗体纯化磁珠为例进行详细描述。操作者可以参照以下步骤中各种缓冲液的用量及容器大小，按比例调整实际操作中各成分的用量。

1、样品处理：取抗体含量约为 0.1~0.15 mg 的样品置于新的 1.5 mL EP 管中，加入抗体结合缓冲液（②） 至总体积为 500 µL（如样品体积大于 500 µL 则无需加入），混合均匀。

2、磁珠预处理：将抗体纯化磁珠（①）漩涡振荡 30 s，使磁珠充分重悬；取 100 µL 磁珠悬液置于另一新的 1.5 mL EP 管中。对磁珠悬液进行磁性分离（将 EP 管放置于磁性分离器）上，使磁珠吸附在管壁至溶液澄清；该操作描述以下省略，弃上清液。从磁性分离器上取下 EP 管。用抗体结合缓冲液（②）洗涤 2 次，弃上清液，管中磁珠可直接用于抗体分离）。

3、抗体吸附：在步骤 2 预处理的磁珠管中加入步骤 1 处理的样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转 EP 管，促使样品和磁珠充分接触并吸附，翻转约 15 min 后进行磁性分离，移弃上清液。

4、磁珠洗涤：向 EP 管中加入 1 mL 抗体结合缓冲液（②），振荡重悬磁珠后进行磁性分离，移弃上清液； 该操作重复 3 次。

5、抗体洗脱（方式 1-高盐弱酸性洗脱）：

1） 抗体洗脱：在步骤 4 完成磁珠洗涤的 EP 管中加入 0.5~1.0 mL 抗体洗脱缓冲液（③），用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约 25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转 EP 管，翻转 10 min 后进行磁性分离，收集上清液至新的 EP 管；

2）抗体透析： 因抗体洗脱缓冲液（③）含有较高浓度的盐分，收集的抗体溶液不能直接用于 SDS- PAGE 检测，但可以用抗体洗脱缓冲液调零进行抗体浓度测定。抗体洗脱缓冲液呈偏酸性（pH 4.5）， 建议操作者用自行配制的中性低盐溶液（即透析液）立即对收集的抗体溶液进行透析处理，以降低抗体失活率，获得较高活性和稳定性的抗体溶液。

6、抗体洗脱（方式 2-低 pH 洗脱）：

1）抗体洗脱：在步骤 4 完成磁珠洗涤的 EP 管中加入 0.5~1.0 mL 抗体洗脱缓冲液（④），用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约 25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP 管，翻转 10 min 后进行磁性分离，收集上清液至新的 EP 管；

2）抗体中和： 因抗体洗脱缓冲液（④）pH 值较低，收集的抗体溶液需要立即加入一定量的抗体中和缓冲液（⑤），一般为收集抗体溶液体积的 1/20~1/10，最终使洗脱的抗体溶液 pH 值保持中性环境，以降低抗体失活率，获得较高活性和稳定性的抗体溶液。收集的抗体可直接用于SDS-PAGE 检测及抗体浓度的测定。

7、磁珠后处理：使用后的磁珠用磁珠洗涤缓冲液（⑥）进行重悬，然后执行磁性分离，弃上清液， 重复操作一次；加入 100 µL 磁珠储存缓冲液（⑦），置于 2~8℃保存。

磁珠再生

1、磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用 5 次后进行磁珠再生处理。

2、按约 1 mL 磁珠 5 mL 的比例加入磁珠再生缓冲液（⑧），振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合，10 min 后进行磁性分离，弃上清液。

3、按约 1 mL 磁珠 5 mL 的比例加入磁珠洗涤缓冲液（⑥）进行重悬，然后执行磁性分离，弃上

清液， 重复以上操作两次。

4、按照约 1 mL 磁珠 1 mL 的比例加入适量磁珠储存缓冲液（⑦），置于 2~8℃保存。

注意事项

1、进行抗体纯化操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。

2、本产品须与磁性分离器配套使用。

3、磁珠使用前应充分振荡均匀。

4、磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。

5、请勿将磁珠冷冻或离心，以免引起不可逆聚集。

6、本产品仅供研究使用。TUNEology 波长可调检测卡盒-->